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管理系统外包报价 嘌呤霉素（puromycin）抗体检测卵白合成和翻译阻碍的旨趣和圭表
发布日期：2024-09-26 16:55 点击次数：175
嘌呤霉素阻碍卵白合成的旨趣：管理系统外包报价
嘌呤霉素（puromycin）和氨酰-tRNA分子3'终端的结构雷同，大略与核糖体的A位点伙同，从而被添加到新合成的肽链中去。puromycin和核糖体的A位点伙同然后掺入延长的肽链之后，则无法不绝参与随后的肽链延长响应，导致卵白质合成的提前隔断，然后开释出C-终端含有嘌呤霉素的不熟练的多肽（如下图红色部分所示）。因此，向细胞中添加puromycin会阻碍细胞内总共的卵白质合成。
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嘌呤霉素阻碍卵白合成旨趣（图片着手于www.cellco.com）
含有puromycin的不熟练的多肽不错被针对puromycin的抗体识别，因此不错通过WB或者IFA检测细胞内总的卵白质合成情况，或者翻译阻碍情况。
puromycin抗体检测卵白翻译阻碍案例详解：
（1）puromycin抗体WB法
如下图所示，作家用鼠诺如病毒（murine norovirus，MNV）感染骨髓着手的巨噬细胞，分裂于感染后的3h、6h、9h、12h和15h收样，每次收样前用10 ug/ml的puromycin经管20min，所在是让puromycin掺入到新和成的多肽中去，然后就能用puromycin的抗体检测新和成的多肽了。后果通晓，跟着感染时辰延长，puromycin抗体大略检测到的卵白含量逐步缩小，融会新和成的卵白减少了，也即是融会注解MNV感染阻碍了卵白翻译。
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鼠诺如病毒感染阻碍宿主卵白翻译（Svenja Fritzlar et al. 2019. mBio）
（2）puromycin抗体IFA法
puromycin的抗体除了不错作念WB，也不错通过作念IFA来检测细胞卵白翻译阻碍。作家雷同是用MNV感染，分裂于感染后的6h、9h和12h固定细胞，固定前用10 ug/ml的puromycin经管30min。
如下图所示，anti-puromycin检测的是新和成的多肽，anti-VPg记号被MNV感染的阳性细胞。尤其是MNV感染12hpi时，MNV阳性的细胞（红色）中puromycin的信号缩小，融会MNV感染的细胞中卵白翻译被阻碍。
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鼠诺如病毒感染阻碍宿主卵白翻译（Svenja Fritzlar et al. 2019. mBio）
puromycin抗体筛选卵白翻译阻碍因子：
小程序开发为了筛选MNV编码的卵白翻译阻碍因子，作家将MNV编码的基因转染到HEK-293T细胞中，管理系统开发价格用10 ug/ml的puromycin经管20min，收样WB用puromycin抗体检测卵白翻译情况，后果通晓NS3大略阻碍宿主卵白翻译。
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雷同的，将MNV编码的基因转染到Vero细胞中，用10 ug/ml的puromycin经管30min，然后用puromycin抗体染色检测卵白翻译情况，后果通晓NS3大略阻碍宿主卵白翻译，因为NS3阳性细胞（红色）中puromycin信号（绿色）是缩小的。
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