管理系统开发资讯 干货共享｜2A肽在病毒学盘登科的应用
什么是2A肽：
2A肽是开始于病毒的短肽，一般为18至25个氨基酸，也被称为“自我剪切”肽。
2A肽功能：
2A肽好像使一条转录居品产生多种卵白，即使交融卵白通过2A肽自我切割分离，产生多种卵白质独随即欺诈各自的功能。2A肽好像完了多基因共抒发、卵白质分离抒发、卵白质功能收复，况兼在抗体制备和病毒学盘登科具有关键酷爱。
2A肽作用机制：
2A肽介导的自我剪切机制是核糖体在2A肽翻译经过中跳过C端酿成的甘氨酰-脯氨酰（GP）肽键。
2A肽有哪些：
当今常用的2A肽有4种：P2A、T2A、E2A和F2A。
1. P2A，开始于猪捷申病毒（porcine teschovirus），氨基酸序列为：（GSG）ATNFSLLKQAGDVEENPGP
2. T2A，开始于明脉扁刺蛾病毒（Thosea asigna virus），氨基酸序列为：（GSG）EGRGSLLTCGDVEENPGP
3. E2A，开始于马甲型鼻炎病毒（Equine rhinitis A virus），氨基酸序列为：（GSG）QCTNYALLKLAGDVESNPGP
4. F2A，开始于手足口病病毒（Foot and mouse disease virus），氨基酸序列为：（GSG）VKQTLNFDLLKLAGDVESNPGP
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图1：4种常用的2A肽氨基酸序列
频繁来说，在使用单个2A肽的情况下，P2A的切割后果最高，险些不错达到100%。其次是T2A，再次是E2A和F2A，F2A的切割后果一般为50%傍边。可是，在串联使用多个2A肽的情况下，还不可通俗地以为将多个P2A或T2A串联起来就能达到最大的切割后果，这需要实验来考证。
另外，夏威夷大学马诺阿分校的Wei Wen Su等东谈主发现了两种开始于紫海胆（紫胆）和加利福尼亚海虫（加利福尼亚海兔）的2A肽，管理系统开发价格分散定名为SP2A和AC2A。这是科学家们初次发现的非病毒开始的2A肽。
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图2：SP2A和AC2A氨基酸序列
近日，来自耶鲁大学的Yuan Ren等东谈主发达了来自马乙型鼻炎病毒（Equine rhinitis B virus 1，ERBV-1）的2A肽切割后果也不错达到70-99%。
2A肽在真核抒发载体构建中的应用案例：
Jin Hee Kim等东谈主将NLS-EGFP-2A-mCherry-CAAX串联抒发，通过WB和免疫荧光考证了4种不同2A肽的切割后果。终局标明：切割后果：P2A＞T2A＞E2A＞F2A。免疫荧光终局终局标明，P2A好像很好地将EGFP和mCherry在空间上分离开来，因为EGFP交融了NLS，因此定位在细胞核内，而mCherry的C末端添加了CAAX异戊二烯化基序，因此好像定位在细胞质膜上。作家进一步考证了2A肽在东谈主源，鼠源和斑马鱼细胞系上的切割后果，其终局一致。
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图3：真核载体构建暗示图
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图4：P2A在HEK293T细胞中的切割后果最高
2A肽在病毒学盘登科的应用案例1-GFP论说流感病毒的构建：
Balaji Manicassamy等东谈主将流感病毒NS1和GFP交融抒发，在GFP的C末端添加P2A肽，从而将NS1-GFP和NEP卵白分离开来。用次枢纽他们见效构建了NS1-GFP交融抒发的重组病毒。该法构建的论说病毒对小鼠的致病性有所缩小，因此在建立小鼠感染模子时，需要擢升攻毒剂量。该放构建的GFP论说病毒好像应用于小鼠活体病毒成像和抗病毒药效评价。
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图5：佩戴GFP论说基因的重组流感病毒的构建
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图6：NS1-GFP病毒的体内特质
2A肽在病毒学盘登科的应用案例2-蓝耳病毒DNA疫苗的构建：
Sochanwattey Meas等东谈主将蓝耳病毒的GP5、M和N基因串联抒发，中间用P2A和F2A组合的形式将不同的居品分离开来。用此枢纽构建的抒发载体好像见效地同期抒发GP5、M和N三个卵白。2A肽的应用为DNA疫苗的构建提供了新的念念路。
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图7：三顺反子基因构建暗示图
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图8： GP5、M和N卵白抒发
参考文件
1. High Cleavage Efficiency of a 2A Peptide Derived from Porcine Teschovirus-1 in Human Cell Lines, Zebrafish and Mice
2. Analysis of in vivo dynamics of influenza virus infection in mice using a GFP reporter virus
3. Production of an antibody Fab fragment using 2A peptide in insect cells
4. Non-viral 2A-like sequences for protein coexpression
5. Co-expression of self-cleaved multiple proteins derived from Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus by bi-cistronic and tri-cistronic DNA vaccines
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